改良苯.酚品红染色

改良苯.酚品红染色

二、实验步骤

　　1、取材：查阅相关植物对应的根尖分裂旺盛期，在此期间剪取新生根尖约2-3cm，纯水稍洗净。

　　2、预处理：用秋水仙素或者8-羟基喹啉预处理或者置于纯水中4℃处理约24h(选做)。

　　3、固定：取出根尖置于卡诺氏固定液(无水乙醇：冰醋酸=3:1混匀)中4℃固定约1-4h，转移根尖至75%的乙醇中保存;

　　4、低渗：取出根尖纯水稍洗2遍，置于纯水中浸泡约30min;

　　5、解离：取出根尖置于1M HCL溶液中60℃处理10-30min，纯水洗2遍，置于纯水中浸泡约30min;

　　6、取材染色：将根尖用纯水清洗2遍后置于载玻片上，切取根尖分生区并拨散，组画笔画圈，晾干或者稍烤干分生区组织细胞，滴加改良苯.酚品红染液染色15-35min;

　　7、压片：直接用染色液封片，稍吸除多余的染色液，盖玻片上覆盖滤纸，用橡皮擦或者手指平整地按压玻片进行压片，分散染色体;

　　8、封片：将制好的玻片放置-20℃下冰冻约10min，取出后用刀片从盖玻片一角迅速撬开，晾干或烤干载玻片和盖玻片，甘油明胶或中性树胶封片。

　　9、显微镜镜检，图像采集分析。

　　三、结果判读：

　　染色体呈深的紫红色，背景浅的紫红色或者无色。

　　四、注意事项：

　　1、若固定后的根尖暂时不使用，保存在75%的乙醇中，下次使用前需要再次固定，4℃条件下约4h。

　　2、压片过程中，防止盖玻片移动或者破裂，得到数量清晰的染色体，此步骤操作较难成功。

　　3、改良苯.酚品红染色液阴凉通风处可保存1年不变质。