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WB(核蛋白)检测服务

简要描述:WB(核蛋白)检测服务,印迹法(Blotting)是指将样品转移到固相载体上,而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。Western Blot是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。

  • 产品型号:茁彩生物
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-12-20
  • 访  问  量:1456
详情介绍


WB(核蛋白)检测服务实验收费标准:

项目编号项目名称计价单位单价

ZC1103

WB(核蛋白、线粒体蛋白、膜蛋白)

180元


服务介绍:

      印迹法(Blotting)是指将样品转移到固相载体上,而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。Western Blot是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。


实验结果展示:


WB(核蛋白)检测服务注意事项

      蛋白样品制备的注意事项:

       1、细胞数量达5×106

       2、将细胞裂解液再离心,收集上清液,加loading煮样5min。

      SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳注意事项:

      1、做胶:防止漏胶、进气泡以及花胶(水封、插梳子和拔梳子)

      2、加样:两边加loading,加样量一样,加样时间要尽量短,以免样品扩散。

      3、电泳:将胶夹好放于电泳槽中,加电泳buffer(内外面不能联通),将电压调到90V开始电泳。

      转膜注意事项:

       1、泡膜:转膜之前将海绵、胶、膜都用预冷的转移buffer浸泡20min。(1.凝胶若是没在预冷的转膜buffer中浸泡,就会在转膜过程中出现凝胶皱缩,导致出现转移条带变形。2.PVDF膜具有疏水性,需用甲醇浸泡)

      2、转膜顺序:阴极碳板+海绵+三滤+胶+膜+三滤+海绵+阳极碳板

      3、转膜条件:0.35A 250V 1h40min 冰浴中进行转膜(具体转膜时间要根据目的蛋白的大小而定;目的蛋白的分子量越大,需要的转膜时间越长,反之则短)

      4、避免直接用手碰杂交膜,使用镊子。因为手上的蛋白和油脂会影响转膜效率并会使膜脏掉。

      5、夹好膜和凝胶后,确定在凝胶/膜和滤纸之间没有气泡存在,否则会导致转膜不*。

      6、保证膜和滤纸的大小和凝胶*一样,过大和过小都会影响转膜效率。

      7、鸡来源的抗体与PVDF和尼龙膜有较强的结合能力,从而产生较高的背景,故如果选择鸡来源的抗体最好使用硝酸纤维素膜(NC膜)

      关于磷酸化蛋白检测的注意事项:

      1、保持待测蛋白处于磷酸化状态!在标本提取液中加入足够的磷酸酶抑制剂(NaF,可以防止去磷酸化),并将标本时刻保持在冰浴中!

      2、使用5%的BSA作为封闭试剂!不能使用脱脂奶粉!(因为脱脂奶粉中含有酪蛋白,会出现很高的背景)。

     抗体保存注意事项:

     1、收到抗体后按要求离心后再打开管盖进行分装盒保存!

     2、对于大部分抗体,比较合适的保存方式是分装后保存在-20℃

   ①分装的量以一次实验用完为好,最少不能少于10μl每份。因为分装体积越小,抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。

   ② 复融后的分装抗体如果一次用不完,将剩余母液保存在4℃,避免再冻起来!

    绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。

    3、大部分抗体收到后4℃短暂保存1-2周对抗体活性是没有影响的。






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