可溶性总糖检测｜茁彩生物

可溶性总糖是植物体内具有重要生理功能的一类小分子碳水化合物，包括还原性糖（葡萄糖、果糖、麦芽糖等）和非还原性糖（蔗糖、棉子糖等）。作为植物能量代谢的核心物质，可溶性糖不仅是呼吸作用的底物，还是低温胁迫下重要的渗透调节物质和信号分子。准确测定可溶性总糖含量，对于研究植物碳代谢、抗逆生理及品质评价具有重要意义。

可溶性糖的定义与分类

• 总糖：指样品中所有糖类物质的总和，包括可溶性糖和不溶性糖（如淀粉、纤维素）

• 可溶性糖：能溶于水及乙醇等极性溶剂的糖类，是本文检测的目标物质

• 还原性糖：分子中含有游离醛基或酮基，能还原斐林试剂等氧化剂的糖类（如葡萄糖、果糖）

经典测定方法与原理

蒽酮比色法（Anthrone Method）

检测原理

• 化学反应：糖类在浓硫酸作用下脱水生成糠醛及其衍生物，与蒽酮试剂缩合形成蓝绿色复合物

• 光谱特性：最大吸收波长为620nm，吸光度与糖浓度呈线性关系

• 反应式：

糖类 + 蒽酮 → 蓝绿色复合物（ε=1.1×10⁴ L·mol⁻¹·cm⁻¹）

试剂配制

1. 蒽酮试剂：0.1g蒽酮溶于100mL浓硫酸（98%），现配现用

2. 标准葡萄糖溶液：1mg/mL（精确称取105℃烘干的葡萄糖0.1000g，蒸馏水定容至100mL）

操作步骤

1. 样品提取：

◦ 称取0.5g鲜样，剪碎后加入5mL 80%乙醇

◦ 80℃水浴提取30min，期间搅拌3次

◦ 4000rpm离心10min，取上清液

◦ 残渣用5mL 80%乙醇重复提取2次，合并上清液

◦ 定容至25mL，即为可溶性糖提取液

2. 显色测定：

◦ 取1mL提取液于试管中，加入4mL蒽酮试剂

◦ 沸水浴中准确反应10min，立即冰浴冷却

◦ 分光光度计620nm处测定吸光度

◦ 同时做空白对照（1mL蒸馏水+4mL蒽酮试剂）

结果计算

公式：可溶性总糖含量（mg/g FW） = (C×V×D)/(W×1000)

其中：

- C：标准曲线查得糖含量（μg）

- V：提取液总体积（mL）

- D：稀释倍数

- W：样品鲜重（g）

苯酚-硫酸法（Phenol-Sulfuric Acid Method）

检测原理

• 显色反应：糖类与苯酚-硫酸试剂反应生成橙黄色复合物（490nm比色）

• 反应特点：

◦ 对游离糖和多糖均有较高灵敏度

◦ 显色稳定（2h内吸光度变化<5%）

◦ 干扰物质较少

关键步骤

1. 样品提取：同蒽酮法

2. 显色反应：取1mL提取液，加入5%苯酚溶液1mL，混匀后快速加入5mL浓硫酸

3. 比色测定：室温放置30min，490nm处测定吸光度

方法比较