扫描电镜SEM检测服务

一、扫描电镜SEM检测服务的制样步骤：

（1）取材固定：新鲜组织确定取材部位，尽量减小牵拉、挫伤与挤压等机械损伤，1-3min内取样，组织块面积不超过3mm2，用PBS轻轻漂洗将样本表面的血污，毛发等去掉，保护好需要扫描的面并做好标记（如在对面进行剪角处理）。迅速投入电镜固定液室温固定2h，再转移至4°保存。

（2）贴壁细胞：贴壁于盖玻片的细胞培养处理完成后弃培养基，用PBS轻轻漂洗后，弃PBS加电镜固定液室温固定2h，再转移至4°保存。注意保护好扫描面避免剧烈震荡细胞脱落。

（3）后固定：固定好的样品经0.1M磷酸缓冲液PB（PH7.4）漂洗3次，每次15min。0.1M磷酸缓冲液PB（PH7.4）配制1%锇酸室温避光固定1-2h。0.1M磷酸缓冲液PB（PH7.4）漂洗3次，每次15min。

（4）脱水：组织依次入30%-50%-70%-80%-90%-95%-100%-100%酒精每次15min,乙酸异戊酯 15min。

（5）干燥：将样本放入临界点干燥仪内进行干燥。（干燥的样品及无机材料不需要以上步骤）


（6）样本导电处理：将样本紧贴于导电碳膜双面胶上放入离子溅射仪样品台上进行喷金30s左右。

（7）扫描电子显微镜下观察采图。

二、扫描电镜SEM检测服务样本准备方法及要求：
1、动植物组织样本：
① 1-3min内取样，组织块不超过3mm2，用PBS轻轻漂洗将样本表面的血污，毛发等去掉，将需要扫描的面做好标记（如在对面进行剪角处理）。

② 取材时一定注意避免镊子挤压等机械损伤，刀片要锋利避免挫伤组织。尤其是注意保护扫描面。

③ 组织取下后立即投入电镜固定液内室温固定2h，再转移至4℃保存，4℃冰袋运输，在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

④ 植物样本放入固定液后需抽气沉底。

2、细胞样本：
贴壁细胞：贴壁于盖玻片的细胞培养处理完成后弃培养基，用PBS轻轻漂洗后，弃PBS加电镜固定液室温固定2h，再转移至4℃保存，4℃冰袋运输，在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

悬浮细胞：离心收集细胞要肉眼可见细胞沉淀芝麻至绿豆大小，弃培养基后用PBS轻轻漂洗后，弃PBS加电镜固定液并将细胞吹打开悬浮于固定液内室温固定2h，再转移至4℃保存，4℃冰袋运输，在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

3、细菌样本：
长于固体培养基的细菌：连带着培养基切下不超过3mm2组织块，有细菌的一面作为扫描面，放于电镜固定液内室温固定2h，再转移至4℃保存， 4℃冰袋运输，在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

悬浮细菌孢子等：离心收集细菌要肉眼可见细菌沉淀芝麻至绿豆大小，弃培养基后用PBS轻轻漂洗后，弃PBS加电镜固定液并将细菌吹打开悬浮于固定液内室温固定2h，再转移至4℃保存，4℃冰袋运输，在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

4、其他如粉末状材料：
直接准备干燥的粉剂。带有磁性的金属材料（铁，钴，镍等）不能做扫描电镜。