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不了解小鼠白介素Elisa的操作步骤?看一眼就懂了!

发布时间: 2023-02-22  点击次数: 718次
  小鼠白介素Elisa试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。特异性抗小鼠IL-4抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本和生物素化的检测抗体,经过孵育,样本中存在的IL-4与固相抗体和检测抗体结合,形成免疫复合物。洗涤去除未结合的物质后,加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素。洗涤后,加入显色底物,避光显色。加入终止液终止反应,在450nm波长(参考校正波长540nm或570nm)测定吸光度值。
  
 

小鼠白介素Elisa

 

  不了解小鼠白介素Elisa的操作步骤?看一眼就懂了!
  
  1、标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可在小试管中进行稀释。
  
  2、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
  
  3、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
  
  4、配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
  
  5、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  
  6、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
  
  7、温育:操作同3。
  
  8、洗涤:操作同5。
  
  9、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟。
  
  10、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
  
  11、测定:小鼠白介素Elisa以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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