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土壤中磷脂脂肪酸(PLFA)的测定

发布时间: 2024-07-03  点击次数: 159次

PLFAs是几乎所有活体细胞膜的主要成分,周转速率极快且随细胞死亡而迅速降解,脂肪酸结构与种类多样,对环境因素敏感,分析结果重复性较好。既可用简单试剂和设备测定由PLFAs转化的磷酸盐以确定微生物总量,也可以根据不同菌群的特定脂肪酸C链长度、饱和度及羟基等取代基位置差异研究特殊功能菌群。在微生物定量及活力测定方面,PLFAs与微生物量C、底物诱导呼吸(SIR)及ATP等测定方法所得结果十分吻合。因此,PLFAs在土壤微生物学研究中很有潜力。

磷脂脂肪酸在土壤中的功能主要包括以下几个方面:

(1)作为细胞膜的组成成分,参与微生物的细胞结构和功能。

(2)可以作为能源来源,供给微生物进行代谢和生长。

(3)参与土壤中的有机质的分解和循环过程。

(4)对土壤中的酶活性和微生物群落结构具有调节作用。

实验步骤

(1)称3 g土壤与15 ml 0.2M甲醇化的KOH混匀,放入离心管中。

(2)在37℃培养1 h,每10 min漩涡震荡一次。

(3)加入3 ml 1.0 M冰醋酸10 ml正己烷,分层。

(4)4800 r离心15 min。

(5)取上清移至试管,在氮气下吹干。

(6)将试管内磷脂脂肪酸溶解于0.5 ml 1:1甲基叔丁基醚:正己烷,转移到气质联用色谱分析用小管待分析。

将处理好的样品用Agilent 6890GC / 5973 MS气质联用仪进行分析,参数设定如下:

色谱柱:利用处理后的石英毛细管柱(0.25 mm×30 nm×0.25 um)。

样口温度为250℃,不分流进样。

采用恒流模式,流速为0.8 ml/min,载气为高纯氦气。

程序升温:80℃(保持2 min),以50°C/min的速度升至150 ℃(保持2 min),以2.5°C/min的速度升至195°C(保持3 min),再以2.5°C/min的速度升至240℃(保持5 min)。

电离方式:EI(70eV)

离子源温度:150 ℃

四极杆温度:230 ℃

接口温度:280 ℃

扫描方式:SIM

C14:0是外标物

磷脂脂肪酸含量计算公式

PLFA(nmol/g土样)=(PPLFA × S × V)/(POSTD × D × R × W)

式中PPLFA和POSTD分别是样品和标准物质的峰值面积,s为外标标准物质的浓度(ng·ul-1),V为样品的测定体积(ul),R为分取倍数,D为稀释倍数,W为烘干土质量(g)。



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