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如何通过酶联免疫吸附测定水产品中的组胺残留

发布时间: 2024-05-08  点击次数: 89次

组胺(Histamine)是一种分子量只有 111 u 的小分子碱。组胺广泛存在于各种有机体中,低浓度时对于维持机体正常生理功能具有重要作用。然而,在食品发酵或者食物腐败变质后,组胺含量明显升高,在一些发酵食品和水产品中通常含有较高含量的组胺,食品中的组胺被人体过量摄入后会引起中毒现象。有报道称当人体摄入 40 mg 以下组胺时就会产生轻微中毒症状,超过 40 mg 摄入即可产生中等中毒症状,大于 100 mg 摄入则产生严重中毒症状。摄入高浓度的组胺食品,会引起人眼结膜充血、头昏胸闷等中毒症状,严重者甚至会致人死亡。由于摄入大量组胺引起的食物中毒时间时常发生,因此,许多国家和组织对食品中的组胺制定 了严苛的标准。

目前水产品中组胺的检测方法主要有比色法、薄层色谱法、生物传感器法、毛细管电泳法和高效液相色谱法等。但大部分方法都比较繁琐、费时、费力且成本高,而且检测灵敏度和检测范围有待提高。由于酶联免疫吸附测定方法有操作简便、灵敏度高、成 本低、便于大规模筛选等优点,目前已成为检测食品中化学污染物的重要工具之一。国内有关食品中组胺的 ELISA 法较少,为了结合我国食品安全检测的国情,更多的进行现场初筛再配合大型仪器进一步确认,探究方便高效的针对组胺残留的免疫检测方法,对于提高实际样品检测效率具有重要意义。对于 ELISA 法检测组胺而言,由于组胺分子量低,分子特征不显著,组胺抗体制备极为关键,直接与蛋白偶联制备作为免疫抗原难以制备出特异性识别组胺的抗体,即使制备出来,由于其特异性和灵敏度太低,检测限一般只能达到 mg/kg 级别,实际应用受限。因此通常的做法是将组胺衍生,制备特异性识别组胺苯醌衍生物的抗体,从而建立基于衍生间接检测组胺的 ELISA 方法。本研究旨在通过制备针对组胺残留检测的有效抗体,建立一种与现有检测方法相比更为灵敏、快速和可靠的免疫检测分析法,并应用在实际样品中组胺残留的快速检测,从而为水产品中组胺残留检测产品的开发提供技术支持。

组胺检测标准曲线绘制

将包被浓度、抗体稀释倍数、酶标二抗稀释倍数以及竞争药物浓度等优化到最佳状态,根据最佳优化条件进行间接竞争 ELISA 测定,以组胺标准品浓度 (μg/L)的半对数值为 X 轴,以 A450nm吸光度比值为Y 轴,绘制标准曲线图。



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