土壤微生物生物量碳（MBC）含量检测-重铬酸钾外加热法

土壤微生物生物量碳（MBC）是指土壤中所有活体微生物身体所含的碳元素的总和，其与土壤有机碳（SOC）共同体现了土壤中有机质的含量情况，在土壤有机碳库中占有至关重要的地位。土壤微生物生物量碳在自然界的碳循环中发挥着关键的作用，它是全球碳循环中的一个重要碳库，能够参与碳的分配和转化。同时，土壤微生物生物量碳还能够作为评价土壤质量、土壤肥力和土壤健康状况的重要指标。

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操作步骤

1）土壤样品熏蒸 

称取相当于 5 g 烘干土重的鲜土，放入培养皿中，连同盛有50 mL 无乙醇氯仿的小烧杯（里面放入少量碎瓷片或小玻璃珠，防止暴沸），和盛有 30mL 1mol/L NaOH 的小烧杯一起放入真空干燥器内（一次可放入 40 个左右的培养皿）。用少量凡士林密封干燥器，抽真空，使氯仿沸腾，并持续 2 min 以上，关闭真空干燥器的阀门，然后将真空干燥器放入 25℃暗室中，保持 24h。24 h 后，取出盛有氯仿（倒回瓶中重复使用）和 NaOH 的小烧杯。再用真空泵反复抽气 4 次，每次 3 min 以上，直到土壤闻不到氯仿味为止(并不安全的做法，建议抽气时间延长，次数3次即可)。另称取与熏蒸处理组数目等量的培养土壤放入另一干燥器中，但不熏蒸，作为对照土壤。

2）土壤微生物碳的测定

从干燥器中取出土样，放入80 mL 塑料瓶中，加入 0.5mol/L K2SO4溶液 100 mL（1:4 土水比），振荡 30 min（25℃，200 r/min-1）后迅速用定性中速滤纸过滤，滤液立即测定或-15℃下保存。吸取5 mL浸提液于100 mL 油浴管（高硼硅玻璃管），加入10 mL 0.018 mol/L K2Cr2O7 - H2SO4溶液（H2SO4 浓度为 12mol/L）【注意：浸提液的量根据土壤微生物碳量考虑，一般越高，取用浸提液越少，这块需要进行多梯度的预实验，确定最佳浸提液与K2Cr2O7 - H2SO4添加量比值】，放入少量石英沙（防暴沸），摇匀后置于 175 ± 1℃的油浴锅中（一般建议选用二甲基硅油）煮沸保持 10 min，冷却后将溶液转移到 150 mL 的三角瓶中，使总体积约为 80 mL，加一滴邻啡罗啉指示剂（注：如果油浴后溶液呈深绿色，滴加1/3滴的邻菲罗啉，滴管轻轻碰触三角瓶内壁即可），用 0.05 mol/L FeSO4溶液滴定至终点。