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ZCIBIO免疫荧光检测

发布时间: 2023-11-10  点击次数: 269次

免疫荧光(IF),是应用抗原与抗体特异性结合的原理,通过荧光标记抗体对组织细胞内抗原进行定位、定性及定量的研究。目前科沿有道主要可以对石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片、组织芯片进行免疫荧光检测。科沿有道目前已突破传统的免疫荧光双标限制,开发出多色免疫荧光技术




实验流程:

冰冻切片免疫荧光实验步骤

1、 冰冻切片固定:冰冻切片从冰箱拿出来复温,晾干水分,冷丙酮固定10min,待丙酮干后于PBSPH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min

2、 抗原修复:组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液(PH8.0)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中低火5min,此过程中应防止缓冲液过度蒸发,切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBSPH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。(修复液和修复强度根据组织来确定)

3、 BSA封闭:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防止抗体流走),在圈内滴加用3%BSA均匀覆盖组织,室温封闭30min

4、 加一抗:轻轻甩掉封闭液,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。(湿盒内加少量水防止抗体蒸发)

5、 加二抗:玻片置于PBSPH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗覆盖组织,避光室温孵育50min

6、 DAPI复染细胞核:玻片置于PBSPH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液,避光室温孵育10min

7、 封片:玻片置于PBSPH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。

8、 镜检拍照:切片于尼康倒置荧光显微镜下观察并采集图像。(紫外激发波长330-380nm,发射波长420nmFITC绿光激发波长465-495nm,发射波长515-555 nmCY3红光激发波长510-560,发射波长590nm

石蜡切片免疫荧光实验步骤

1、 石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗。

2、 抗原修复:组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液(PH9.0)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中火至沸后断电间隔10min中低火至沸,此过程中应防止缓冲液过度蒸发,切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBSPH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min(修复液和修复条件根据组织来确定)

3、 BSA封闭:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防止抗体流走),在圈内滴加用3%BSA均匀覆盖组织,室温封闭30min

4、 加一抗:轻轻甩掉封闭液,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。(湿盒内加少量水防止抗体蒸发)

5、 加二抗:玻片置于PBSPH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗覆盖组织,避光室温孵育50min

6、 DAPI复染细胞核:玻片置于PBSPH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液,避光室温孵育10min

7、 封片:玻片置于PBSPH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。

8、 镜检拍照:切片于尼康倒置荧光显微镜下观察并采集图像。(紫外激发波长330-380nm,发射波长420nmFITC绿光激发波长465-495nm,发射波长515-555 nmCY3红光激发波长510-560,发射波长590nm



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