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ELISA常见封闭液简介

发布时间: 2022-11-21  点击次数: 1853次
不同的实验中我们都会遇到封闭液,像常规的ELISA实验中封闭液也是不可queshao的,那让我们来看看哪些是ELISA实验中常见的吧!
     ELISA的试剂盒说明上写封闭液用蔗糖溶液,一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封闭空白位点,蔗糖封闭的原理:
  • ELISA实验中,蔗糖本身没有封闭作用;
  • 封闭液一般是BSA(牛血清白蛋白)、脱脂奶粉、酪蛋白、明胶等或者是Tween-20(0.05 - 0.1%)稀溶液PBST或者TBST等。
  • 加蔗糖的主要目的是保护ELISA板子吸附(包被)的蛋白,起到“保护剂”的作用。
  • 蔗糖溶液一般在ELISA板子经过BSA封闭后加,当然也有将蔗糖加到封闭液中同时进行处理;那一种更好需要你实验后来验证。但多数选择前者。
除此外,封闭剂还可用5%的脱脂乳,0.4%的明胶,但是实验表明前者比较好,后者不容易洗干净未结合上的明胶。
  • SA是常用的封闭剂,成分单一适用于大多数情况。若免疫原是偶联BSA的, BSA有很强的免疫原性,会导致产生很多的针对BSA的抗体,为避免交叉反应,不能用BSA、脱脂奶粉等封闭,可以选用酪蛋白或无蛋白的封闭剂封闭。大部分BSA中有少量的抗体残留,会导致抗原/抗体之间的交叉反应,产生高背景,杂带较多或使得本底水平增高。

  • 封闭血清的原理主要有两点,一是待检样本会有些与蛋白非特异性结合的物质,从而导致背景过高,因此可以用BSA或血清封闭掉这部分非特异性的结合,从这点看,BSA和血清没有明显区别。二是待检样本中可能会有Fc受体,可以和抗体恒定区结合,与抗体特异性无关,封闭血清中有抗体,因此用血清可以封闭掉一抗及二抗和样本Fc受体之间结合。BSA则无法封闭Fc受体。

  • 脱脂奶粉的优点是价钱便宜,但是由于成分相对复杂,所以适用范围要狭窄一些。磷酸化抗体也许会导致背景增加,此外,因为自身含有,不能用于标记的抗体系统。

  • 酪蛋白 和BSA作用类似,普通酪蛋白不易溶解。中性和碱性条件下带有负电性,与同样带负电荷胶体金之间存在排斥力,而膜一般都是带正电荷,会与酪蛋白有一定的吸附作用,用酪蛋白封闭效果好些。无蛋白化合物  甲醛:与PVDF膜表面的微结构反应或者结合,使之失去结合蛋白的疏水力或者空间结构域。去污剂(吐温-20):Tween-20是一种非离子型去污剂,有复性抗原的作用,与膜疏水性吸附,有很强的对非特异性吸附的洗脱作用,同样可以降低蛋白间的疏水作用,可提高特异性的识别能力。

 

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