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固氮酶检测能够直接反映固氮微生物的固氮能力 

发布时间: 2022-10-21  点击次数: 1731次
  在自然界中,固氮微生物可以在固氮酶的作用下,通过生物固氮(以自生固氮、共生固氮或联合固氮的形式)将大气中的分子氮转化为氨,参与氮循环。研究固氮微生物不仅有利于氮肥的合理施用,而且有利于微生物肥料的发展。固氮酶检测能够直接反映固氮微生物的固氮能力。
  
  生物固氮是固氮微生物*的生理功能,由固氮酶催化。固氮酶活性的检测对于生物固氮工程的研究具有重要意义。以乙炔还原法为基础,为研究人员提供了固氮酶活性、海藻固氮菌、土壤固氮酶活性和固氮酶检测。
 
  

固氮酶检测
 

 

  取适量样品于带有异丁基橡胶塞的密封瓶中,抽出部分空气,注入等量的标准乙炔气体,调节光照时间和温度进行培养,培养后取密封瓶中的气体进行检测。乙烯含量用外标法定量,配置5种不同浓度的乙烯气体进行检测。根据浓度和峰面积建立标准曲线,每批样品都要重新绘制标准曲线。方法采用标准样品法进行质量控制。每10个样品用已知浓度的标准乙烯气体样品进行测试,同一样品平行测试5次,计算准确度和精密度,准确度和精密度应在20%以内。
  
  1、检测原理:乙炔还原法(固氮酶能将乙炔气还原成乙烯气)
  
  2、测试平台:气相色谱仪-氢火焰离子检测器(GC-FID)
  
  样品要求:
  
  1、土样(≥8.0g/样;如果待测含水量≥10.0g/个样品),用干冰或冰袋运输。
  
  2、根瘤样品(≥1.0g/样品)在液氮中冷冻,在-80℃下储存,在干冰中运输。
  
  3、细菌(≥15ml/样品),无氮培养基活化,冰袋运输。
  
  固氮酶检测实验方案:
  
  1、称取约1.0g结节组织,放入20mL空瓶中。用注射器抽取2ml空气后,用注射器注入2ml乙炔气体。样品中乙炔的浓度为10%。
  
  2、将瓶子放在30℃的恒温水浴中60分钟,避光。
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